平板培养，简单说就是将含有微生物的样本均匀涂布在平板培养基上，让微生物在适宜的条件下生长繁殖，形成单个可见的菌落这个过程中，”倒平板”其实更准确的说法应该是”倾注平板”，也就是将培养基倒入平板皿中，凝固后形成表面这个看似简单的步骤，却有很多细节需要注意，稍有不慎，就可能导致实验失败，甚至带来安全隐患无论你是刚入行的实验室小白，还是对平板培养感兴趣的个人玩家，这篇教程都值得你仔细阅读
一、倒平板前的准备工作：细节决定成败
话说回来，做实验啊，最重要的就是准备工作要充分很多人以为倒平板就是简单地把培养基倒进平板皿里，殊不知前面的一系列准备工作才是关键我刚开始做实验的时候，就因为没把准备工作做好，结果培养基凝固后表面不均匀，菌落长得歪歪扭扭，最后实验数据全废了，真是欲哭无泪啊
1. 培养基的制备与灭菌
咱们得先说说培养基平板培养基一般是由营养琼脂（Nutrient Agar）或者特定的复合培养基组成的我常用的营养琼脂，主要成分就是蛋白胨、牛肉浸膏和琼脂制备的时候，得按照说明书上的比例，先把蛋白胨和牛肉浸膏溶解在蒸馏水中，调节pH值到合适的范围（一般是6.0-7.4），然后加入琼脂，加热溶解，最后分装到高压灭菌锅里这里要注意啊，琼脂的溶解温度得足够高，一般在沸点附近，这样才能确保琼脂完全溶解，否则冷却后平板表面就会不均匀
高压灭菌是关键步骤我一般用121℃、15psi（约103kPa）的条件灭菌15-20分钟这里引用一下《微生物学实验教程》上的话：”高压灭菌能杀灭所有微生物，包括芽孢，是保证平板无菌的关键”灭菌后的培养基要趁热分装到无菌的平板皿里，这时候动作要快，尽量减少培养基和空气接触的时间，避免杂菌污染
2. 平板皿的选择与处理
平板皿的选择也很重要市面上有各种材质的平板皿，我一般用玻璃的，因为玻璃的平整度和透明度都比较好，观察菌落也更清晰现在也有塑料的平板皿，方便清洗和重复使用，但要注意，塑料的表面可能会吸附一些残留物，影响菌落的生长
使用前，平板皿要清洗干净，然后用70-75%的酒精擦拭消毒，或者直接高压灭菌我有个习惯，每次做实验前，都会用酒精灯火焰烧一下平板皿的边缘，进一步杀灭可能存在的杂菌这里有个小技巧，就是可以用无菌的镊子平板皿的边缘，在酒精灯火焰上快速烧一下，注意别烧得太久，否则平板皿会变形
3. 无菌操作环境的准备
做平板培养啊，无菌操作是重中之重我一般在一个超净工作台里操作，因为超净工作台能提供无菌的空气环境，减少杂菌污染的风险在使用前，要提前开启超净工作台，让它运行15-30分钟，让里面的空气流动起来，形成负压状态
除了超净工作台，无菌操作服、口罩、手套也是必不可少的我一般穿实验服，戴N95口罩和一次性手套，这样可以最大限度地减少自身对实验环境的污染有时候，我还会在超净工作台里放一个紫外灯，实验开始前照射15-30分钟，进一步杀灭可能存在的杂菌
4. 样本的准备与处理
样本的准备也很重要样本可以是土壤、水、食物等含有微生物的样品我以前做实验的时候，经常用土壤样本采集样本的时候，要尽量选择新鲜的、未受污染的样品采集回来后，要尽快处理，避免样本中的微生物死亡或者过度繁殖
处理样本的时候，一般要先进行稀释比如，土壤样本可以先用无菌水冲洗几次，然后取一部分样品，用无菌水进行系列稀释稀释的目的，是让样本中的微生物浓度降低到适宜平板培养的程度平板培养的菌落数量应该在30-300之间，太少了难以计数，太多了容易重叠，影响观察
5. 计数方法的确定
倒平板前，还得确定计数方法常用的计数方法有平板划线法和倾注平板法平板划线法适用于菌落计数，而倾注平板法适用于菌落总数和活菌数的测定我这次要教大家的，就是倾注平板法
倾注平板法的基本原理，是将一定量的样本均匀分布在平板培养基上，然后让培养基凝固，形成表面这样，每个菌落都能在表面独立生长，便于计数具体操作步骤，我后面会详细讲
二、倾注平板的操作步骤：手把手教你
好了，准备工作做好了，咱们就可以开始倾注平板了这个操作啊，看似简单，但有很多细节需要注意，我这就手把手教大家
1. 将平板皿放置在无菌环境中
打开超净工作台，调整好灯光和风速，确保视野清晰然后，用无菌的镊子平板皿的边缘，小心地将其放置在超净工作台的工作区域内注意，手不要直接接触平板皿，避免污染
2. 加入适量的培养基
接下来，要加入适量的培养基每个平板皿加入15-20毫升的培养基比较合适加入的量要均匀，避免一次加入过多，导致培养基溢出
这里有个小技巧，就是可以先在超净工作台外量好培养基，然后分装到无菌的移液管里，再进入超净工作台加入平板皿这样可以减少培养基在超净工作台外的时间，降低污染风险
3. 混合样本
如果样本是液体，可以直接用无菌的移液管吸取适量的样本，加入到平板皿中如果是固体样本，比如土壤，可以先将其研磨成粉末，然后用无菌的移液管吸取适量的样本粉末，加入到平板皿中
加入样本后，要轻轻晃动平板皿，让样本和培养基混合均匀但要注意，不要晃动得太剧烈，否则会导致培养基溢出
4. 倾斜平板使培养基均匀分布
混合均匀后，要轻轻倾斜平板皿，让培养基均匀地分布在平板皿的底部这里有个关键点，就是倾斜的角度要合适倾斜的角度应该在30-45度之间，太低了培养基分布不均匀，太高了培养基容易溢出
倾斜平板的时候，要缓慢、轻柔，避免产生气泡如果有气泡产生，可以用无菌的移液管将气泡吸出
5. 轻轻晃动平板
倾斜平板后，要轻轻晃动平板皿，让培养基在平板皿的表面形成一层均匀的薄膜晃动的幅度要小，避免产生气泡
6. 静置凝固
晃动均匀后，要静置平板皿，让培养基凝固凝固的时间一般在30-60分钟之间，具体时间取决于培养基的成分和环境温度
凝固过程中，要避免移动平板皿，否则会导致培养基表面不均匀，影响菌落的生长
7. 倒置平板并标记
培养基凝固后，要小心地将平板皿倒置，即菌落生长的一面朝下这样做的目的是防止冷凝水滴落到菌落上，影响菌落的生长
倒置后，要用记号笔在平板皿的边缘标记清楚实验信息，比如样本名称、实验日期、培养基成分等标记要清晰、规范，方便后续的观察和记录
8. 保存与培养
将标记好的平板皿放入培养箱中，在适宜的温度下培养细菌的培养温度是37℃，培养的时间是24-48小时真菌的培养温度是25-28℃，培养的时间是3-5天
培养过程中，要定期观察平板的生长情况，记录菌落的形态、颜色、大小等特征如果有异常情况，要及时处理
三、倾注平板的注意事项：细节决定成败
倾注平板看似简单，但有很多细节需要注意，稍有不慎，就可能导致实验失败