流式细胞术是一种广泛应用于生物学、医学和免疫学领域的强大技术，它主要用于分析细胞表面和细胞内的分子表达，鉴定异质细胞群中的不同细胞类型，评估分离亚群的纯度以及分析细胞大小和容积。
流式细胞术主要通过测定荧光标记的抗体产生的荧光强度来工作，这些抗体结合了特定的细胞分子，如碘化丙啶与DNA的结合。其染色过程包括从细胞培养物或样品制备单细胞悬液，然后将获得的细胞与荧光标记的抗体结合，最后通过流式细胞仪进行分析。
流式细胞仪主要有两种类型：临床型（小型机、台式机）和综合型（大型机、分析型）。其中，EPICS ALTRA和EPICS XL/XL-MCL以及FACS Vantage和FACS Calibur是两种主要的流式细胞仪型号。除了检测分析功能外，综合型流式细胞仪还具有细胞分选功能，多用于科学研究。
关于流式细胞仪的主要技术指标，其分析速度一般每秒可检测1000-5000个细胞，大型机甚至可达每秒上万个；荧光检测灵敏度能够测出单个细胞上少于600个的荧光分子，两个细胞间荧光差异大于5%即可区分；前向角散射（FSC）光检测灵敏度反映了被测细胞的大小，一般能够测量到0.2m-0.5m；分辨率通常用变异系数CV值来表示，一般流式细胞仪能够达到小于2.0%；分选速度一般大于1000个/秒，分选细胞纯度可达99%以上。
在流式细胞仪的工作过程中，细胞悬液通过激光束，形成细流，一次仅通过一个细胞。检测器会检测前向和侧向散射光以及染色细胞发射的荧光。当细胞悬液通过流式细胞仪时，从小喷嘴中流出的细胞悬液在鞘液的流体力学作用下向中心聚拢。形成的细流可使细胞依次通过激光束。
当激光照细胞上时，会产生光的散射。前向散射（FS）与细胞的大小相关，侧向散射（SS）则与细胞的颗粒度成比例。可以根据细胞大小和颗粒度的差异来区分不同的细胞群。通过检测特定蛋白的荧光来确定细胞的类型。
在抗体染色方面，有直接染色和间接染色两种方法。直接染色是将细胞与直接偶联到荧光染料的抗体一同培养；间接染色则是使用未用荧光标记的一抗和荧光标记的二抗进行检测。还有细胞内染色和蛋白的检测等方法。
对于荧光染料偶联剂的选择，不同的荧光染料有不同的相对强度。高度表达的抗原可以通过任何染料检测到，而表达较少的抗原则需要使用较亮的染料如PE或APC来提供高信号背景比，以区分阳性细胞。相对荧光染料强度取决于使用的仪器，因此选择合适的FACS仪器非常重要。
流式细胞术是一种强大的工具，可用于深入研究细胞的特性和功能，为生物学、医学和免疫学领域的研究和应用提供有力支持。
